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聚丙烯酰胺价格行情

聚丙烯酰胺如何凝胶

    

      聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离,鉴定,纯化和制备DNA片段的最常用方法,也用于RNA的纯化和分离。近十年来,随着分子生物学的迅速发展,对DNA电泳,染色和分析的要求越来越高。基于多年的工作经验,我们总结了一套快速,高效,高分辨率的DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染和干胶技术。 

   
 聚丙烯酰胺

 1、凝胶的配制

     

      材料:10×TBE运行缓冲液,30%丙烯酰胺/亚甲基双丙烯酰胺,N,N,N',N'-四甲基乙二胺(TEMED),40%过硫酸铵,3×上样缓冲液(40%蔗糖,3×TBE,0.01%溴酚蓝))。JUNYI电泳仪,电泳槽。

     

      灌胶:根据表1的分离胶和浓缩胶配方,配制胶。安装充满凝胶的玻璃板,混合分离凝胶的组分,将其填充到适当的高度,并立即用去离子水填充上部以隔离空气。在分离凝胶聚合(约15分钟)后,除去去离子水。混合浓缩凝胶的成分,加入分离凝胶,插入梳子,等待10分钟浓缩凝胶进行聚合。取下牙齿梳子并备用。

       

      上样:将样品和上样缓冲液以3:1的比例混合。样品加载量为1~10μl,一般PCR扩增产物一般为3~5μl,DNA浓度约为0.1~1μg/孔。

       阳离子聚丙烯酰胺

     2、电泳

     

      使用恒流电泳。浓缩凝胶的电流应略小,一般为10~15mA。样品完全进入分离凝胶后,加倍(30mA)。将示踪剂溴酚蓝电泳至凝胶底部以完成电泳。 

     

     3、染色

     

      使用银染色方法。在染色过程中,试剂的纯度和温度直接影响染色时间和染色效果。建议染色温度保持在45~50°C。如果染色温度低,则应延长染色时间。因此,制备的试剂应在加热前置于培养箱中进行预热。染色步骤如下:去除凝胶→固定:10%乙醇5分钟→硝化:1%硝酸5分钟→用去离子水冲洗3次,每次30秒→银染:0.1硝酸银2次,每次5分钟→去离子水冲洗2次,每次30s→开发:3%碳酸钠,0.05%甲醛5min(视颜色效果而定)→固定:10%醋酸5min→用去离子水冲洗3次次,每次30s→甘油浸泡5min。注意:如果染色时间是室温下上述时间的2倍左右。

      

     4 、干胶

     

      将两片玻璃纸浸泡在水中后,将一片涂在玻璃板上,将浸泡在3%甘油溶液中的电泳胶置于玻璃纸上,并在其上覆盖另一透明胶片以除去气泡。将剩余的玻璃纸堆叠在玻璃后面,然后在顶部按另一块玻璃板。玻璃板的两端用橡皮筋固定,在室温下干燥12小时。


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